Diabetologia：激活但功能受损的记忆Tregs在1型糖尿病患者进展缓慢的过程中逐渐扩展到

从第一次显露现胰脏自身抗形体到显露现1改型癌症临床研究副作用的重大突破率在儿童时期就有不错的揭示，多个胰脏自身抗形体外观上性的儿童除此以外70%在血浆变换后10年内患上癌症，而随访15年的儿童这一数目上升到84%。相对来说之下，占临床研究1改型癌症一半以上的改型1改型癌症的发病机制还并未得不到充分的数据分析。

越来越多的人开始用于有种系统种系统来假设1改型癌症的重大突破：个形体在显露现多种胰脏自身抗形体时转回第1阶段，显露现血糖异常时转回第2阶段，显露现副作用时转回第3阶段。一些多发胰脏自身抗形体外观上性的个形体，在1期和2期，重大突破速度快，并发展为发病的1改型癌症。我们之前揭示了一四组在首次检查到多种胰脏自身抗形体采样后至来得少10年无癌症的极快重大突破者，这四组患儿人数来得少，但外观上并不具体。随后，我们推断出胰脏自身淋巴细胞特异性CD8+T细胞内加成在重大突破平稳的患儿里面理论上不实际上，但在现阶段发病和长期实际上的癌症患儿里面很较易检查到。这可能表明，与重大突破患儿相对来说，这些患儿自身免疫加成的适度增强。

早期数据已经有，尽管适度性T细胞内(Treg)需求量正常，但癌症患儿实际上一些特性不足之处，其里面包括对IL-2的加成战斗能力降低。此外，癌症患儿里面的效可不CD4+T细胞内可能对适度来得具抵抗性，乏善可陈为效可不T细胞内的可抑制增强，自然产生的Treg和形体外产生的作用于Treg，以及淋巴细胞随之而来的CD4+T细胞内里面IL-2加成增强。本数据分析的目的是揭示了CD4+适度性T细胞内(Treg)在群集极平稳重大突破者里面的外观上，他们的平均年龄为43岁(31-72岁)，随访时间为18-32年。

方法：BOX数据分析是一项以成年人结合的纵向数据分析，在21岁以下复发的患儿亲属里面定期检查1改型癌症的致命因素。我们之前揭示了长期平稳重大突破者的外观上，他们依然多重胰脏自身抗形体外观上性超过10年，但并未显露现癌症的临床研究副作用，快性或非顺利完成性自身免疫。随后，10名继续依然无癌症并主动提供大量血液采样的平稳重大突破者纳入T和B细胞内特性分析。在目前的数据分析里面，8名快重大突破者(SP四组)，里面位年龄43岁(31-72岁)，18 - 32岁间的胰脏自身抗形体外观上性。所有的参与者都处于1改型癌症重大突破的1期，尽管一些人随后失去了胰脏自身抗形体对某些淋巴细胞的外观上性加成，然而，一名患儿已经处于2期至来得少6年，但并未显露现临床研究副作用，一名患儿被诊断为癌症，该受试者72岁，在采集实验采样时，其HbA1c升高到53 mmol/mol(7%)，在数据分析里面对该供形体顺利完成了实际上评估。分离外周血单个核细胞内(PBMCs)，使用多给定流式细胞内拳法和T细胞内可抑制试验评估供形体里面Treg的频谱、表改型和特性。用于FlowSOM和CITRUS(聚类确认、连续性和回归)顺利完成无监督聚类分析，评估Treg表改型。

结果：与健康供形体相对来说，来自快重大突破形体的清醒CD4+T细胞内的监督聚类推测，启动时的清醒CD4+ Treg频谱上升，与免疫可抑制作用于的TNFR相关细胞(GITR)隐含上升有关。一名HbA1c升高的患儿与重大突破平稳者和给定的对照四组相对来说，Treg谱有所并不相同。特性已经有，与健康供形体相对来说，来自平稳重大突破形体的Treg介导的CD4+效可不T细胞内可抑制轻微损坏。乏善可陈为对效可不CD4+T细胞内CD25和CD134隐含的可抑制上升。

由此可知1 深入的表改型分析推测，CD4+Treg亚改型在快重大突破队列里面上升。由FlowSOM降解的Treg四楼，组织起来在来自所有供形体的活CD4+CD45RA -细胞内上。根据标上物隐含确认显露10个元簇:清醒T细胞内_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;清醒T cell_4;CD49b清醒T细胞内;HLA-DR + GITR +清醒T细胞内;CPUTreg_1;CPUTreg_2;CPUTreg_3;和CPUTreg_4。(a)用于9个并不相同Treg标上降解的10个元簇的MST。每个终端象征性一个战略性(100个战略性)，来得大的元战略性(10个元战略性)在终端四组四周着色。每个终端里面的碗由此可知问到单个标上的隐含层次。(b)每个元聚类的热由此可知，以推测整形体标上隐含。(c, d)为HD四组(c)和SP四组(d)降解由此可知，以及FlowSOM定位的每个元簇的覆盖层。(e-l)相对来说之下同位素为每个metacluster箱内该线由此可知(同位素> 0.05%)确定为HD和SP四组:CPUTreg_2 (e),CPUTreg_3 (f),CPUTreg_4 (g), HLA-DR + GITR +清醒T细胞内(h)、清醒T cell_1(i),清醒T cell_2 (j),清醒T cell_3 (k) n d CD49b清醒T细胞内(l)。绿色白点象征性捐助者SP 606。**p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩核查。此键适用于由此可知形部分(a)， (c)， (d)和d (e-l)

由此可知2 用于CITRUS的预测模改型推测，Treg频谱的上升是重大突破平稳的徽章。评定奈斯(a - f)和柑橘分析(g-k)比较SP参与者和给定的HD参与者在CD4+CD45RA−T细胞内上的差异。(a)亲本CD25+ cd127 lotreg和CD25loCD127+T c e l群形体的象征性性由此可知。CD25+ cd127lotreg被CD39和FOXP3富集，然后通过HLA-DR和GITR隐含顺利完成分离，建模FlowSOM群形体。(b) HD(网纹)和SP(星点)四组以及供形体SP 606(绿色)里面CD25+ cd127的频谱概述由此可知。(c-f) CD25+CD127loCD39+FOXP3+和CD25loCD127+奈斯可数的箱内该线由此可知;(c) HLA-DRloGITR−(CPUTreg_2)， (d) HLA-DRintGITRlo(CPUTreg_3)， (e) HLA- d RhiGITR+(CPUTreg_4)， (f) HLA- d RhiGITR+(HLA-DR+GITR+CPUT cell)。(g - i)柑橘簇螺旋由(g) CD127， (h) CD25和(i) FOXP3隐含强度着色，左下角突显露的簇被定位为SP和HD队列间的并不相同。(j)箱内该线由此可知推测了在SP(星点)和HD(灰点)四组里面，CITRUS清醒Treg_3和Treg_4的相对来说之下同位素(数目)。(k)直方由此可知推测每个簇的表改型(黄色)和Treg标上相对来说之下隐含与背景隐含(粉红色);上列，CPUTreg_3;下面一行，CPUTreg_4。背景与所有其他簇里面标上的隐含有关。*p< 0.05， **p< 0.01, Wilcoxon匹配符号秩核查

由此可知3 与健康献血者相对来说，重大突破平稳者清醒treg的GITR上升。每个清醒CD4+T细胞内元簇(清醒T细胞内_1;清醒T cell_2;清醒T cell_3;CD49b +清醒T细胞内;HLA-DR + GITR +清醒T细胞内;CPUTreg_2;CPUTreg_3;来自FlowSOM的memory Treg_4)检查每个隐含标上的发生变化。(a,b)来自HD (a)和S (b)队列的隐含热由此可知(sp606不包括在内)。(c,d)清醒Treg_4元簇里面所有HD(蓝灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(绿色)的FlowSOM GITR隐含串联，推测直方由此可知(c)和概述由此可知(d)。Wilcoxon匹配符号秩和核查，p< 0.07(绿色)所有供形体包括，p< 0.05(粉红色)供形体SP 606和给定的HD不包括在测试里面。(e,f) HLA-DRhiGITR+Tregs里面GITR隐含，从评定奈斯，从所有HD(蓝灰色)、所有SP(粉红色)和SP 606(绿色)串联，推测直方由此可知(e)和概述由此可知(f) *p< 0.05, Wilcoxon匹配符号秩核查

由此可知4 来自平稳重大突破的CD4+ treg细胞内掌控效可不CD4+T细胞内的战斗能力降低。SP四组用粉红色的该线和白点问到，HD四组用灰色的该线和白点问到，绿色的该线/白点问到供形体sp606。用于CD4+CD25+ Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(此番者)被标上为CFSE, Treg按观察的数目指示剂。用抗CD3 /28微珠作用于细胞内，培训3过后顺利完成流式细胞内拳法检查。(a-d)与CD4+此番者相对来说之下可不的treg培训(自形体)(e-h) HD、SP或SP 606 Treg与HD此番者培训。(a,b,f) CFSE裂解(a,e)和CFSE可抑制平均值(b,f)。(c, d,h) CD25 (c,g)和CD134 (d,h)的可抑制平均值。用于外观上性对照(启动时的响可不细胞内不含treg)计算可抑制平均值。*p< 0.05， **p< 0.01， ***p< 0.001，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

由此可知5 效可不CD4+T细胞内对平稳重大突破的T细胞内作用于的可抑制来得敏感。SP四组用粉红色的该线和白点问到，HD四组用灰色的该线和白点问到，绿色的该线/白点问到供形体sp606。用于CD4+CD25+Treg分选试剂盒对CD4+T细胞内顺利完成分选。CD4+CD25−(此番者)被cfsel标上，treg按观察的数目指示剂。用抗CD3 /28微珠作用于细胞内，培训3过后顺利完成流式细胞内拳法(CD25反染)和细胞内因子分析。HD Treg与HD、SP或sp606此番者一同培训。(a,b) CFSE裂解(a)和CFSE可抑制前年(b)。(c,d) CD25可抑制前年(c)和CD134可抑制前年(d)。(e,f) IFN-γ(e)和IL-17A (f)在共培训里面的隐含。***p< 0.001， **p< 0.01，重复测量双向方差分析。†p < 0.0 5 Bonferroni的事后多重比较测试

结论：我们得显露的结论是，来自平稳重大突破子的作用于清醒CD4+Treg在GITR隐含里面得不到了扩展和丰富，强调了进一步数据分析Treg在1改型癌症风险个形体里面的异质性的必要性。

原文显露处：

Boldison J, Long AE, Aitken RJ,et al.Activated but functionally impaired memory Tregs are expanded in slow progressors to type 1 diabetes.Diabetologia 2021 Oct 28